【涨知识】GPC凝胶渗透色谱常见问题解答

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凝胶渗透色谱 (Gel Permeation Chromatography,GPC),又称为尺寸排阻色谱(Size Exclusion Chromatography,简称SEC),可能它具有按溶质分子体积大小分离的独特长处,在可是有领域内取得了很快的发展和日益广泛的应用。不少亲戚亲们在使用GPC时碰到了或多或少哪几种的间题,下面小编给您总结了凝胶渗透色谱常见哪几种的间题的解答,希望能帮到您。

哪几种的间题1:凝胶渗透色谱的填料咋样选着?用于有机污染物分析中洁净车间样品的凝胶填料,能否至少符合1个多条件:①可使用有机溶剂洗脱;②凝胶孔径较小。选着凝胶填料规格主要根据目标物和欲分离的杂质分子大小来决定。相似要分离的农药分子量较小,在实际应用中宜采用孔径小的凝胶填料,应用的主要凝胶填料为交联葡聚糖凝胶和交联聚苯乙烯凝胶,凝胶的洁净车间效果取决于目标物和干扰物的分离程度。凝胶渗透色谱常用填料:(1)硬质凝胶硬质凝腔包括多孔硅胶和多孔玻璃。多孔硅胶是一种广泛采用的无机凝胶,以硅酸钠或乙氧基硅烷为原料制备。多孔硅胶的特点是化学惰性高,热稳定性和机械速度好,使用温度高,寿命长。粗粒度多孔硅胶柱效一般在4000-4000塔板/m,比交联聚苯乙烯柱效低。微粒硅胶已发展成很好的高速、高效凝胶色谱填料,分别有54000塔板/10cm和1.2×104塔板/400cm,柱效超过聚苯乙烯微粒凝胶。多孔硅胶平均孔径10~400nm,排除极限104~106,分离范围102 ~ 5×106,固流比一般在0.8-1.1范围内。多孔玻璃是与多孔硅胶相似的无机凝胶,它的特点是孔径分布很窄,分离选着性强;但填料易碎,不易装填紧密,柱效较低。无机凝胶的主要缺点是占据 吸附效应。通常采用硅烷化避免消除吸附性。无机凝胶能用有机溶剂、水、酸性水溶液作淋洗剂,但能否用强碱性溶剂(pH>8)淋洗。(2)半硬质凝胶半硬质交联聚苯乙烯凝胶是一种应用很广的半硬质有机凝胶,它是苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物,常用于有机溶剂系统,除丙酮、乙醇等强极性溶剂外,或多或少有机溶剂均可使用;它的溶胀和收缩性较小,每平方厘米能承受几百千克力的压力,可用于高速液相色谱}其化学稳定性好,适用碱性溶剂,能耐400℃的高温。商品聚苯乙烯凝胶有粗粒度(37~76μm)和细粒度(10Fem)两类,前者柱效一般为4000-4000塔板/m,后者是高教凝胶,柱效达15×104塔扳/400cm。相似凝腔的特点是直径分布比较宽,因而分子量分离范围比较大,约102—5×106,周流比0.7~1.3。半硬质凝胶还有聚甲基丙烯酸乙二酯凝胶,它能承受120kgf/cmz左右的压力,可使用有机溶剂或水溶剂。聚醋酸乙烯凝胶,可分离分子量106Da以下的化合物,能承受400kgf/cmz的压力,除采用一般有机溶剂外,还能使用不适用聚苯乙烯凝胶的极性有机溶剂。(3)软质凝胶交联葡聚糖凝胶是发展最早、使用最广的有机软质凝胶,商品牌号Sephadex。它是由细菌发酵最好的法律法律依据以蔗糖为培养基制备成高分子量的葡聚糖,而且用盐酸降解成平均分子量为4X104—20×104Da的葡聚糖,以环氧氯丙烷交联成体型型态。或多或少凝胶适用于水、二甲基亚砜、乙二醇及低级醇等溶剂,主要用于分离生物高分子,如蛋白质、核酸、酶以及多糖类。其分子量分离范围从小于4000Da到8×105Da,固流比0.8—1.8。交联葡聚糖在溶剂中溶胀,能否承受压力,其粒度有10—40μm、400~400μm、400~400μm等不同范围。或多或少软质凝胶有火山岩石石的琼脂糖凝胶、合成的交联聚丙烯胺凝胶。它们适用于水溶甲烷固体系。软质凝胶还有低交联聚苯乙烯凝胶、聚醋酸乙烯酯凝胶、聚甲基丙烯酸缩水甘油醚凝胶等。哪几种的间题2:凝胶渗透色谱的溶剂咋样选着?凝胶渗透色谱分离与试样、固定相、流动相之间的相互作用无关,但要求凝胶的孔径和孔径分布与试样分子量大小和分子量分布相匹配。用作流动相的溶剂不都能否易挥发样品并对凝胶有一定的膨胀力,且与固定相凝胶有或多或少相似性质,能浸润凝胶,避免凝胶吸附作用。当采用软质凝胶时,所选着溶剂应能使凝胶溶胀,可能软质凝胶的孔径大小是溶剂吸留量的函数。溶剂黏度影响柱效,可能高分子量试样的扩散系数小,高黏度溶剂限制扩散作用,而且应选着黏度尽可能低的溶剂。溶剂能否与检测器匹配,目前凝腔渗透色谱最常用的示差折光检测器,溶剂与被测试样的折射率相差越大越好;若采用紫外检测器,应使用无紫外吸收的溶剂。凝胶渗透色谱分离,常通过升高柱温来增加样品易挥发度,降低溶剂黏度,增加分子扩散,提高分离度和分析速度,因而老是选着较高沸点的溶剂。良好的溶剂有益于提高待测物质的易挥发度,避免操作时因分析对象的改变而更换溶剂。可能GPC为液相色谱,要求溶剂的熔点在室温以下,而沸点应高于实验温度,且溶剂的黏度小,以减小流动阻力。另外溶剂还能否具备毒性低、易于纯化、化学性质稳定及不腐蚀色谱设备的特点。根据凝胶渗透色谱对溶剂的基本要求,除一般液相色谱常用溶剂,如乙醇、环己烷、苯、卤代甲烷、水、二甲亚砜、二氧六环、四氢呋喃外,还使用或多或少或多或少液相色谱很少采用的溶剂,如氯代苯、氯代甲苯、间甲苯酚、邻氯苯酚等,它们大多数是各种聚合物的良好溶剂。哪几种的间题3:在避免高背压和高剪切时,是在1个多较低的流速下运行GPC/SEC(而且你有足够的时间)就足够了,为哪几种还是说要选着更大颗粒的色谱柱?大分子化合物是非常敏感的,可是有通过液相色谱(LC)系统以非常高的压力对高分子质量或高分子链施加压力可能会原困 高分子链降解,产生片面的结果。系统中的总压力主要取决于流速、流动相粘度、温度、内径、应用的色谱柱数量以及色谱柱固定相的颗粒大小。 当对高分子量化合物进行分析时,应避免使用小颗粒色谱柱。[1] 建议在操作高摩尔质量的样品时使用较大的颗粒尺寸,可能这都能否减少剪切应力。同样能否注意的是在或多或少情况表下要使用孔隙率较大的色谱柱,这都能否进一步减小剪切应力。实际上对于高摩尔质量的样品来说,可能时间允许的化,大粒径和低流速的组合才是最理想的。可能你使用的是高粘度溶剂,没办法 同样建议在较高的温度下运行(以降低流动相粘度)。 对于哪几种低摩尔质量的样品,其中,高分辨率是能否的(相似分离低聚物),但不推荐使用大颗粒色谱柱来克服反压哪几种的间题。大颗粒会原困 较低的平板测数,从而降低分辨率。同样对于使用高粘度溶剂来说,大多数小摩尔质量的样品同样适合高温度和低流速,可能这俩种途径都能增加分辨率从而提供更好的质量传输。哪几种的间题4:在更换洗脱剂时,色谱柱都能否保持稳定?可能您认为算是有必要针对特定溶剂设置专门的色谱柱,从而在更换溶剂时更换色谱柱?可能在纯四氢呋喃(THF)和蕴含小量打上去剂的THF(如酸或胺)之间反复进行切换,您会为甚做?一般来说,使用的溶剂与柱填料的极性相似,如针对聚苯乙烯-二乙烯苯色谱柱的THF、氯仿、二氯甲烷或甲苯,更换溶剂应该不必对色谱柱产生影响。然而,最好是在0.3-0.5 mL/min的较低的流速下缓慢交换溶剂。从色谱柱中更换出来的溶剂应直接倒进废物箱中,一起去此时应将检测器占据 断开情况表。从原则上讲,溶剂是必能否更换的;而且这其中时间可能会是1个多哪几种的间题,可能从一种溶剂更换至另一种溶剂,重新建立溶胀平衡所花的时间,比取得稳定RI基线的时间要长的多。而对于哪几种极性明显不同的溶剂来说,亲戚亲戚亲们推荐使用不同的色谱柱,以匹配不同的凝胶溶胀。亲戚亲戚亲们甚至建议根据使用的溶剂对色谱柱进行排序。请注意在大多数情况表下,选着与固定相不同极性的溶剂,可能是避免其和溶剂之间占据 相互作用的更好的最好的法律法律依据。 对于纯溶剂和含打上去剂(如胺、酸、盐)的溶剂之间转换的哪几种的间题上,目前亲戚亲戚亲们并没办法 发现占据 任何的哪几种的间题。 在任何情况表下,色谱柱都应当储占据 不含打上去剂(无盐、胺、酸)的纯溶剂中。唯一的例外是针对水相应用的色谱柱,在其中应加入小量的乙醇或NaN3(0.05g/L),以避免藻类的生长。哪几种的间题5:通过加入盐或其它共溶剂来改变溶剂组成的情况表,能否对检测器进行校准吗?标准样品中算是应该加入样品的改性剂?在GPC/SEC中,校准老是困扰着亲戚亲戚亲们的哪几种的间题。通常要用到以下一种类型的校准: (1).几乎所有的用户都在进行色谱柱的校准,具体操作最好的法律法律依据是亲戚亲们首先测量不同摩尔质量的校准物质的洗脱体积,而且绘制摩尔质量(或粒径)的对数与对应的洗脱体积之间的校准曲线(参见里面哪几种的间题)。(2)在或多或少情况表下,用户可是能对高效液相色谱仪(HPLC)的检测器进行校准。哪几种情况表通常是指GPC/SEC分析中使用多检测、三检测、光散射或黏度检测器时,可能是愿意测定浓度、分析共聚物等情况表。在哪几种情况表下,通过测量不同浓度的校准物质来选着检测器响应。 在这俩种情况表下,亲戚亲戚亲们都建议在同样的条件下进行校准。可是有校准物质也应该使用和样品一样的改性剂或相同的共溶剂来运行,而且校准物质和样品都应该使用流动相来制备。哪几种的间题6:相较于通常的盐类化合物来说,您咋样看待哪几种对仪器腐蚀性更大/更小的盐?相似,能让亲戚亲戚亲们得到更好的分析结果,但对仪器腐蚀性更强的二甲基甲酰胺(DMF)与溴化锂。通常来说,相较于或多或少的盐类化合物,卤化物的腐蚀性要更强,同样的氯化物比溴化物要更具腐蚀性。不幸的是,在常用的有机溶剂中,氯化锂和溴化锂比或多或少锂盐的易挥发度要更好;此外,较之于或多或少的反离子,锂的分解能力要更出众,而且亲戚亲戚亲们并没办法 不多的选着余地。在水性溶剂中的中性盐,如硝酸盐或硫酸盐都能否用于替代氯化钠,以减少腐蚀的危险。打上去哪几种盐类化合物的主要原困 是屏蔽静电的相互作用并减少聚合物的分解。 使用盐溶液的1个多重要因素是确保系统运行的溶剂始终保持新鲜,从而节约操作的时间。老是以低流速的情况表运行,以避免盐结晶易挥发和重腐蚀。可能系统在很长的一段时间内没办法 运行,没办法 在关闭以前应该更换纯净的溶剂。哪几种的间题7:混合床色谱柱及单孔径色谱柱两者之间的利弊? 这是1个多不能自己回答的哪几种的间题,可能这里占据 1个多设计理念的哪几种的间题,一起去有或多或少方面都能否考虑。让亲戚亲戚亲们就从“线性校正曲线”现在时候刚结束谈起。真是当今在实验室中,研究员更广泛地使用都能否避免更僵化 算法的计算机,而且对简单数学的要求可能普遍减少,但大多数人似乎还是比较乐于接受线性关系的模式。 不幸的是,摩尔质量的对数与洗脱体积之间的关系都在线性的。GPC/SEC校正曲线在型态上通常为S形,而且摩尔质量的对数与洗脱体积两者绘制出来的图形也为S形。大主次时间多项式函数的第3(立方的)、第5或第7项用于进行数据拟合。而且该校准曲线的斜率也得到相应的评估,这可是 1个多很好的避免过度拟合的最好的法律法律依据。该最好的法律法律依据使研究人员都能否充分利用色谱柱的完全分离范围。请注意,当占据 摩尔质量的最高点或最低点时,线性色谱柱同样也是非线性的,而且可能样品在该区域进行洗脱,能否配合不同的拟合最好的法律法律依据。 线性或混合床色谱柱是色谱生产商激烈竞争下的产物。生产不仅涉及特殊的合成路线,更多的以前是对单孔径色谱混合的精益求精。线性色谱柱的主要优点是,它们都能否在1个多恒定的分辨率下,在1个多宽泛的摩尔质量范围内进行分离,对于常规QC也是非常理想的工具,而可能用户能否避免不同摩尔质量,也都能否帮助用户对色谱柱进行筛选。你都能否通过打上去相相似型的线性色谱柱来简单地实现分辨率的提高。然而,当能否分离更高或更低的摩尔质量时,要改变摩尔质量的分离范围是非常困难的。错误匹配孔隙的风险非常高,相似当线性色谱柱与哪几种适用于低聚物分离的单色谱柱结合时。 单孔径色谱柱的主要优点是其提供了高速度的分离,但其分离的摩尔质量范围是有限的。而且,单孔径色谱柱常常要与或多或少色谱柱结合使用。都能否通过增加和移除色谱柱的最好的法律法律依据,来适应改变的分子量及时间需求。或多或少最好的法律法律依据的1个多附加优点是,具有最大孔隙率的色谱柱可优先用于分离高摩尔质量(以及高粘度)的聚合链,从而避免粘性指进。而且何为最佳类型的色谱柱取决于实验室的需求。